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膀胱癌是泌尿系统高发肿瘤,浅表性膀胱癌发展成为浸润性膀胱癌后,预后较差。该研究利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默rictor基因后,观察其对人膀胱癌T24细胞在体内外生长的影响。方法:构建3个rictor-RNAi表达载体(1#、2#和3#)和1个阴性对照载体。采用瞬时转染和稳定转染技术筛选出干扰效果明显的单克隆稳定细胞株。应用细胞计数试剂盒(cell count...
构建FAK基因RNA干扰慢病毒载体。方法 选定FAK基因RNAi靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA(引物),与经XhoⅠ和HpaⅠ双酶切后的慢病毒载体pLentilox3.7(pLL3.7)连接,产生pLL3.7 FAK慢病毒载体, 经XbaⅠ和NotⅠ酶切电泳筛选阳性克隆,测序鉴定。用PHR、pVSVG和pLL3.7 FAK慢病毒载体共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢...
探讨靶向骨桥蛋白基因(osteopontin,OPN)的siRNA片段对U87胶质瘤细胞生长和侵袭力的影响及其可能的作用机制。方法:根据OPN基因序列设计并合成的siRNA片段(OPN RNAi)转染U87细胞。MTT法检测U87细胞增殖;Western blotting检测OPN及基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease,MMP)2、MMP9蛋白的表达;Transwell小室...
利用siRNA在乳腺癌细胞内诱导RNAi,抑制人端粒酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因表达,在体外细胞水平探讨RNAi对MCF-7乳腺癌细胞生长的影响。 方法:构建靶向hTERT基因的siRNA(hTERT-siRNA),转导入MCF-7乳腺癌细胞,在瘤细胞内诱导RNAi,采用细胞增殖抑制实验、RT-PCR法、Western ...

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