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探讨 shRNA 靶向沉默接触蛋白-1（CNTN1）基因表达对人乳腺癌细胞株 MDA-MB-468 裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法 18 只 4 周龄雄性 BALB/c 裸鼠随机均分为 3 组，收集处于对数生长期的 MDA-MB-468 细胞（空白对照组）、转染无义 shRNA 片段的 MDA-MB-468 细胞（空载体组）及转染 shRNA 载体片段的 MDA-MB-468 细胞（沉默组）分...
探讨甲状腺转录因子（TTF-1）对肺腺癌细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）药物敏感性及细胞上皮间质化的影响。方法将培养后的肺腺癌HCC827细胞分为空载体组、阴性质粒转染（NC-shRNA）组和阳性质粒转染（TTF-1-shRNA）组，通过shRNA干扰技术抑制细胞中的TTF-1基因表达，用流式细胞仪测定转染前后细胞凋亡率和细胞周期变化。不同浓度的吉非替尼（10、20、40、...
shRNA沉默STAT3基因对结肠癌细胞增殖及顺铂敏感性的影响
信号转导与转录激活子3 RNA干扰 结肠癌 顺铂
2014/2/25
构建携带信号转导与转录激活子3(STAT3)基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体，观察pGPU6/GFP/Neo- STAT3重组质粒对HCT116细胞顺铂化疗敏感性的影响。方法 设计并构建稳定转录shRNA STAT3的质粒，采用脂质体法转染结肠癌HCT116细胞，Western blot法检测转染后STAT3蛋白表达变化，MTT法检测细胞增殖变化。重组质粒联合顺铂作用于HCT116细胞...
小鼠单核巨噬细胞Ufm1基因shRNA慢病毒载体构建及鉴定
RNA干扰 泛素折叠修饰因子 慢病毒载体 RAW264
2013/8/29
构建小鼠Ufm1基因RNA干扰慢病毒载体，并实现该基因在小鼠单核巨噬细胞系(RAW2647)中的稳定表达抑制。方法 根据小鼠Ufm1基因设计两条RNA干扰序列，合成靶序列双链DNA，与pFU-GW-RNAi载体连接，PCR筛选阳性克隆，测序鉴定。pFU-GW-RNAi载体、pHelper 10载体及pHelper 20载体共转染293T细胞包装产生慢病毒颗粒，并测定其滴度，随后感染RAW26...
构建靶向血管平滑肌细胞和内皮细胞磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)基因的短发卡干扰RNA(short hair-pin RNA,shRNA)表达载体，研究其对上述细胞PI3K基因的靶向沉默作用，探索抑制移植血管狭窄的基因防治手段。方法 根据Genbank中大鼠PI3K p110β亚单位编码基因Pik3cb序列设计并合成两条shRNA寡核苷酸片段...
探讨谷胱甘肽巯基转移酶P1 (glutathione S-transferase P1,GSTP1) 基因沉默对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145 增殖活性和对化学治疗药物敏感性的影响。方法:根据选取靶序列形成短发卡状RNA(short hairpinRNA, shRNA) 的DNA 模板设计3 条表达载体(shRNA255, shRNA554, shRNA593),并克隆到质粒pGPU6/G...
构建靶向抑制脆性组氨酸三联体（FHIT）基因的短发夹双链RNA（shRNA）真核表达质粒,观察FHIT抑制后对胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响。方法 构建FHIT基因特异性的小RNA干扰质粒PGPU6/GFP/Neo-shRNA1、PGPU6/GFP/Neo-shRNA2,利用脂质体LipofactamineTM2000转染胃癌细胞BGC-823,实验分为未转染组、阴性对照组（转染PGP...
小鼠TRAF6基因shRNA真核表达载体的构建与表达
小鼠 TRAF6基因 shRNA真核表达载体
2009/6/25
目的: 构建并筛选肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)短发夹RNA(shRNA)表达质粒. 方法: 针对小鼠TRAF6 mRNA设计4条理论上最佳的siRNA序列, 经退火成互补双链, 将相应双链DNA插入pGCsi-U6/GFP/Hygro质粒中, 构建重组表达质粒pGCsi-TRAF6 -shRNA1, 2, 3, 4, 并以不同比例DNA质粒/脂质体转染重组质粒(1∶2、2∶5、1∶3和...
慢病毒介导shRNA特异性沉默livin基因促进SPC-A1细胞凋亡
livin基因 RNA干扰 慢病毒载体 细胞凋亡
2014/4/14
建立慢病毒介导的livin基因沉默系统，探讨其对肺癌细胞凋亡的影响。方法：Livin shRNA慢病毒感染肺腺癌细胞株SPC A1沉默livin基因表达。应用PI染色经荧光镜下观察SPC A1细胞凋亡形态，流式细胞术检测SPC A1细胞凋亡率及亚二倍体峰形成，Real time PCR及Western blotting方法检测livin和caspase 3表达的改变。结果：livin基因在肺腺癌细...